“玩转离心机”离心protocol有奖征集活动火热进行中-yb体育官方

本实验全部操作均在贝克曼库尔特4度离心机中操作
co-ip实验详细操作方案：
待验证互作的a和b质粒共转染细胞（转染实验步骤略）约48h后收集细胞样品，用pbs轻轻洗3遍，加入lysis buffer裂解液（已加入各种蛋白酶抑制剂和0.1m dtt）600µl，冰上裂解30min，用枪头轻轻吹下细胞裂解物吸入ep管中，4℃离心机12000rpm 10min，取出约60µl上清作为阳性对照，剩余上清转移至新的ep管中，按bca法测定蛋白浓度。
预处理protein g beads：向ep管中加入琼脂糖g蛋白40µl，以及1%bsa封闭液500µl，4℃旋转摇床摇荡4h，然后beads和1%bsa混合液4℃离心10000rpm 10s，弃去上清，再加入600µl lysis buffer，4℃旋转摇床润洗10min，然后4℃离心10000rpm 10s，弃上清，加入ip一抗约3µl和至少450µg总蛋白，4℃旋转摇床过夜，然后4℃离心10000rpm 10s，小心弃上清，加入500µl lysis buffer对beads进行清洗，旋转摇床摇5min，4℃离心10000rpm 10s，最后留约20µl上清液，加入5×loading buffer 5µl，和阳性上清对照一起煮沸5min，跑sds-page，通过western blotting进行蛋白互作情况的检测。
血清分离实验方法：
由于本课题组涉及部分应用研究实验，因此常常采集动物血液样品进行相关实验的验证研究。采集来的血液一般是通过贝克曼库尔特4度离心机进行分离，首先是把采血器中的血液样品移至1.5ml离心管，然后在4度离心机中离心8000 rpm 4min，轻轻取出离心管，将上层血清移至新的ep管中，标记好编号、日期、动物种类，进行elise等后续检测。